字南阳。昆山玉山人。少习兵法，饶膂力，擅韬略。明万历二十一年（1593年）武进士。以战功累迁狼山副总兵。年60余，谢病家居。清顺治二年（1645年），清兵下江南，县丞阎茂才迎降，入郡献版图，任知县。闰六月十二日，阎下令限五日内剃发，违者处死。城中士民大哗，奋起杀阎茂才，推佐才为帅。他辟己家为帅府，于十五日冯牙誓师，值邑人陈宏勋偕旧令杨永言，率领义军进城捍卫，又推陈宏勋为右帅，杨永言为监纪，兼主县事。七月初四，清军东下，陈宏勋率舟师近战，不敌，退入城。黄昏时分，佐才冒大风雨立城墙，督同部下发矢，击毙清将一人，骑兵20余人。翌日清兵连发巨炮，城破，王佐才领兵巷战，矢尽力竭，不屈而死。